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【摘要】目的建立西蘭花種子中萊菔硫烷的HPLC含量測定方法。方法色譜柱：Waters公司XBridgeTMC18(150mm×4.6mm,5μm)；流動相：甲醇水(體積比30∶70)；流速：1.0mL/min；PDA檢測器；檢測波長：240nm；柱溫:30℃。結果萊菔硫烷在14.6～292.5μg/mL范圍內線性關系良好,r=0.9994，平均回收率為97.32%（RSD=1.2%）。結論本法簡便、準確，重復性好，可用作西蘭花種子的質量控制，為不同產地不同品種的西蘭花種子的收購及栽培等提供有效監控依據。

【關鍵詞】西蘭花種子；萊菔硫烷；HPLC；含量測定

Abstract:ObjectiveToestablishamethodforcontentanalysisofsulforaphaneinbroccoliseeds.MethodsSampleswereanalyzedonaWatersXbridgeTMC18(150mm×4.6mm,5μm)columnbyusingmethanolwater(30∶70)asthemobilephase.Theflowratewas1.0ml/min.Thedetectionwavelengthwas240nm.Thecolumntemperaturewas30℃.ResultsThecalibrationcurvewaslinearovertheconcentrationof14.6～292.5μg/mlforsulforaphane(r=0.9994).Theaveragerecoveryofsulforaphanewas97.32%andRSD1.2%.ConclusionThemethodissimple,accurate,reproducibleandcanbeusedforthequalitycontrolofbroccoliseeds.

Keywords:broccoliseeds；sulforaphane；HPLC

西蘭花又名綠花菜、青花菜等，為十字花科蕓苔屬甘藍種中以綠色花球為產品的一個變種，一、二年生草本植物。20世紀50年代，西蘭花就已經成為國際上最受歡迎的抗癌抗衰老的十字花科蔬菜，并被譽為“防癌新秀”［1］。

西蘭花中所含的萊菔硫烷、烯丙基異硫氰酸鹽、苯乙基異硫氰酸鹽等異硫氰酸鹽類化合物可以有效地預防肝癌、肺癌、前列腺癌、乳腺癌、直腸癌、胃癌等癌癥［2，3］。而其中的萊菔硫烷是目前發現的抗氧化、防癌、抗癌活性最顯著的異硫氰酸鹽類化合物，是一種有效的保護酶誘導物,能夠防護致癌化合物引起的傷害，也因此有開發成抗癌藥或保健品的價值，具有較為廣闊的市場前景［4］。有關十字花科植物中萊菔硫烷的含量測定已有文獻報道［5，6］，本研究對不同產地不同品種的西蘭花種子中萊菔硫烷的含量進行了比較，方法簡便準確，重復性好，可用作西蘭花種子的質量控制，為不同產地不同品種的西蘭花種子的收購及栽培等提供有效監控依據。

1儀器與試藥

1.1儀器

Waters2695/2996高效液相色譜儀；Empower色譜工作站；十萬分之一電子天平（Sartorius）；KQ250B型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器廠）；FW80密封式高速超細粉碎機（上海市國創建筑機械廠）。

1.2試劑與試藥

甲醇(色譜純，英國TEDIA公司)；三蒸水（自制）；萊菔硫烷對照品(sigma公司，含量＞98%)；實驗所用樣品見表1,經本院生藥教研室鑒定均為西蘭花種子。

表1不同品種西蘭花種子樣品（略）

Tab.1Sampleofdifferentkindsofbroccoliseed

2方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱：Warers公司產XbridgeTMC18(150mm×4.6mm,5μm)；流動相：甲醇水(體積比30∶70)；流速：1.0mL/min；檢測波長：240nm；進樣量：10μL；柱溫30℃。

2.2對照品溶液的制備

精密稱取萊菔硫烷對照品5.85mg，置20mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，得到質量濃度為292.5μg/mL的對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取不同品種的西蘭花種子，粉碎成粉末，過20目篩,取粉末0.3g,精密稱定，加1mL蒸餾水,超聲30min后，置35℃水浴水解4h,加入10mL甲醇，超聲30min后，濾過,濾渣用約8mL甲醇分3次洗滌，合并濾液并定容至20mL。再經0.45μm濾膜濾過得供試品溶液。

2.4系統適用性試驗

分別吸取對照品及西蘭花藥材溶液各10μL，注入液相色譜儀。在此條件下，萊菔硫烷色譜峰與其相鄰組分峰達到基線分離，理論塔板數以萊菔硫烷計不低于5300。見圖1。

A.萊菔硫烷對照品;B.西蘭花種子樣品

圖1HPLC色譜圖（略）

Fig.1HPLCchromatogram

2.5線性關系考察

精密量取“2.3”項下儲備液分別用甲醇稀釋制成質量濃度為14.6、58.5、117.0、175.5、234.0和292.5μg/mL的對照品溶液，分別進樣20μL，以峰面積(A)對質量濃度(ρ)進行回歸分析,得回歸方程:A=3743.7ρ-2878.2,r=0.9994。結果表明萊菔硫烷的質量濃度在14.6～292.5μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

2.6重復性試驗

精密稱取1號種子粉末6份,按“2.4”項下制備，依法測定萊菔硫烷的含量。結果平均含量為1.4014%,RSD為0.49%。

2.7中間精密度試驗

精密吸取濃度為292.5μg/mL的對照品溶液10μL,重復進樣6次,以萊菔硫烷峰面積計算，RSD=0.14%，表明中間精密度良好。

2.8穩定性試驗

取重復性試驗中同一濃度供試品溶液室溫下放置，于0、2、4、6、8h后依法測定萊菔硫烷的含量，結果其RSD值為0.84%，表明樣品溶液在8h內測定結果穩定。

2.9加樣回收率試驗

精密稱取9份已知含量的1號種子樣品0.15g,按“2.4”項下，同法制成供試品溶液。經0.45μm微孔濾膜過濾，各取續濾液0.5mL，分別置于25mL量瓶中，分別加入不同量的質量濃度為292.5μg/mL的萊菔硫烷對照品溶液0.1、0.2、0.3mL，甲醇定容至刻度。按“2.1”項下色譜條件測定萊菔硫烷的含量,結果平均回收率為97.32%,RSD為1.20%,見表2。

表2萊菔硫烷加樣回收率試驗（略）

Tab.2Theresultsofrecoverytest

2.10樣品的含量測定

取不同品種的西蘭花種子按“2.4”項下，同法制成供試品溶液，依法測定，結果見表3。

3討論

3.1從表3可以看出,不同品種的西蘭花種子中萊菔硫烷的含量有明顯差別，臺灣和日本進口的西蘭花種子萊菔硫烷的含量明顯沒有我國的高，但是我國產的幾種西蘭花種子中萊菔硫烷的含量也有較大差別。本方法簡便、準確，可作為西蘭花種子的質量控制，同時為不同產地的西蘭花種子的收購及栽培等提供有效依據。

表3西蘭花種子中萊菔硫烷的含量（略）

Tab.3Contentsofsulforaphaneinbroccoliseeds

3.2制備供試品溶液采用的前處理過程的原理是：異硫氰酸鹽以其前體芥子油苷的形式存在于西蘭花種子中，完整的芥子油苷沒有防癌活性，萊菔硫烷等異硫氰酸鹽是由西蘭花種子中的芥子油苷經過內源性黑芥子酶水解才能產生；粉碎種子過程中，隨著種子細胞壁的破碎內源性黑芥子酶得以釋放出來［2］。故本試驗關鍵步驟是水解，本試驗采用正交試驗篩選出了最佳的水解條件；由于甲醇會使黑芥子酶滅活,故測定加樣回收率時采取水解后再加入萊菔硫烷對照品的方法。

【參考文獻】

［1］季宇彬，池文杰，鄒翔，等.西蘭花中蘿卜硫素提取、分離與抗癌活性研究［J］.哈爾濱商業大學學報:自然科學版,2005,21(3):270-273.

［2］單毓娟.十字花科蔬菜的癌癥預防作用［J］.國外醫學衛生學分冊,2005,32(5):269-273.

［3］王舒然，夏薇.萊菔硫烷與腫瘤［J］.疾病控制雜志,2004,8（5）:452-455.

［4］LAURENCEG，PENGFEIL，SOLANGEL，etal．Sulforaphane,anaturaloccurringisothiocyanate，inducescellcyclearrestandapoptosisinHT29humancoloncancercells［J］．CancerResearch,2000，60(5):1426．

［5］梁浩，袁其朋，東惠茹，等.十字花科植物種子中萊菔硫烷含量的比較［J］.中國藥學雜志,2OO4,39(12):898.

［6］胡曄，梁浩，袁其明.十字花科植物種子中萊菔硫烷的薄層色譜鑒別［J］.北京化工大學學報：自然科學版，2000，6（2）：237-238.